實(shí)驗(yàn)一 常用培養(yǎng)基的制備、滅菌與消毒

實(shí)驗(yàn)二 土壤中微生物分離純化培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)三 菌種保藏

實(shí)驗(yàn)四 細(xì)菌形態(tài)觀察及單染色

實(shí)驗(yàn)五 放線菌及霉菌形態(tài)觀察

實(shí)驗(yàn)六 革蘭氏染色及芽孢染色

實(shí)驗(yàn)七 酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒定

實(shí)驗(yàn)八 微生物直接計(jì)數(shù)法及測(cè)微技術(shù)

實(shí)驗(yàn)九 大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)十 水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)十一細(xì)菌細(xì)胞的生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)十二噬菌體的分離、純化及效價(jià)測(cè)定

實(shí)驗(yàn)一 常用培養(yǎng)基的制備、滅菌與消毒

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

了解培養(yǎng)基的配制原理；掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；了解常見(jiàn)滅菌、清毒基本原理及方法；掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過(guò)濾除菌的操作方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長(zhǎng)繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因素和水。根據(jù)微生物的種類和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌囵B(yǎng)基也有不同的種類和配制方法。

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時(shí)又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需要的最基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，所以可供微生物生長(zhǎng)繁殖之用。

干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過(guò)升溫使蛋白質(zhì)變性從而達(dá)到殺死微生物的效果。

三、試劑與器材

1.器材 試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養(yǎng)基、分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、棉花、牛皮紙、記號(hào)筆、麻繩、紗布、吸管、培養(yǎng)皿、電烘箱、注射器、微孔濾膜過(guò)濾器、鑷子等。

2.試劑 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1.稱量→溶化→調(diào)pH→過(guò)濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無(wú)菌檢查

2.干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開(kāi)箱取物

3.高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無(wú)菌檢查

4.過(guò)濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無(wú)菌檢查→清洗滅菌

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1.要嚴(yán)格按配方配制。

2.調(diào)pH不要過(guò)頭。

3.干熱滅菌要注意物品不要堆放過(guò)緊，注意溫度的時(shí)間控制，70oC以下放物、取物。

4.高壓滅菌要注意物品不要過(guò)多，加熱后排除冷空氣，到時(shí)降壓回零取物。

5.過(guò)濾除菌要注意各部件滅菌，壓濾時(shí)，壓力要適當(dāng)，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。

實(shí)驗(yàn)二 土壤中微生物分離純化培養(yǎng)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù)；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)特征；進(jìn)一步熟練和掌握微生物無(wú)菌操作技術(shù)；掌握微生物培養(yǎng)方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱為微生物的分離與純化。常用的分離、純化方法：?jiǎn)渭?xì)胞挑取法，稀釋涂布平板法，稀釋混合平板法，平板劃線法 稀釋涂布平板法步驟：倒平板－制備土壤污水稀釋液－涂布－培養(yǎng)－挑菌落；平板劃線法步驟：倒平板－標(biāo)記培養(yǎng)基名稱－劃線。

三、試劑與器材

1.器材 盛9m1無(wú)菌水的試管、盛90m1無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶、無(wú)菌玻璃涂棒、無(wú)菌吸管、接種環(huán)、酒精燈、無(wú)菌培養(yǎng)皿、顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板等。

2.試劑 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，高氏1號(hào)培養(yǎng)基，查氏培養(yǎng)基

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1.土壤稀釋液的制備

2.微生物分離純化：稀釋涂平板法，平皿劃線分離法，微生物培養(yǎng)技術(shù)

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1.掌握含菌培養(yǎng)基的配制，嚴(yán)格控制溫度。

2.平板劃線應(yīng)防止染菌，同時(shí)應(yīng)注意劃線深度及密度。

實(shí)驗(yàn)三 菌種保藏

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.學(xué)習(xí)并掌握菌種保藏的基本原理。

2.掌握常用的幾種不同的菌種保藏方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

微生物個(gè)體微小、代謝旺盛、生長(zhǎng)繁殖快，如果保存不妥容易發(fā)生變異和雜菌污染，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡等現(xiàn)象。因此，保存好菌種是非常必要和重要的。常用的菌種保藏方法包括傳代培養(yǎng)法、載體法、懸液法、冷凍法和真空干燥法

三、試劑與器材

1.材料 大腸桿菌、青霉菌、放線菌

2.試劑 液體石蠟、甘油、五氧化二磷、95％乙醇、10％鹽酸、無(wú)水氯化鈣、食鹽、干冰

3.器材 無(wú)菌吸管、無(wú)菌滴管、無(wú)菌培養(yǎng)皿；安額管、凍干管、40目與100目篩子、油紙、濾紙條(0.5X1.2cm)、干燥器、真泵器、真空泵、真空壓力表、噴燈、L形五通管、冰箱、低溫冰箱(―30℃)、超低溫冰箱和液氮罐等。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1.斜面保藏法

2.液體石蠟法

3.穿刺保藏法

4.砂土管保藏法

5.冷凍真空干燥保存法

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1.清楚各種保藏方法的優(yōu)缺點(diǎn)，針對(duì)不同要求選擇適宜的保藏方法。

2.熔封安瓶時(shí)防止封閉不嚴(yán)。

3.液氮凍存操作應(yīng)防止凍傷。

實(shí)驗(yàn)四 細(xì)菌形態(tài)觀察及單染色

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.了解簡(jiǎn)單染色法的原理，并掌握其操作方法。

2.學(xué)習(xí)并掌握微生物涂片、染色的基本技術(shù)和無(wú)菌操作技術(shù)。

3.鞏固顯微鏡(油鏡)的使用方法。

4.初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征。

二、實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)菌個(gè)體微小，且較透明，必須借助染色法使菌體著色，與背景形成鮮明的對(duì)比，以便在顯微鏡下進(jìn)行觀察。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌煞譃楹?jiǎn)單染色法、鑒別染色法和特殊染色法等。簡(jiǎn)單染色法是最基本的染色方法，是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色。此法操作簡(jiǎn)便，適用于菌體一般形狀和細(xì)菌排列的觀察。常用堿性染料進(jìn)行簡(jiǎn)單染色。

三、試劑與器材

1.材料 大腸桿菌，枯草芽孢桿菌

2.試劑 呂氏堿性美藍(lán)染液(或草酸銨結(jié)晶紫染液)、齊氏石炭酸復(fù)紅染液。

3.器材 顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯)等。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

簡(jiǎn)單染色法：涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1.涂片時(shí)，生理鹽水及取菌不宜過(guò)多，涂片應(yīng)盡可能均勻，

2.水洗步驟水流不宜過(guò)大，過(guò)急，以免涂片薄膜脫落。

實(shí)驗(yàn)五 放線菌及霉菌形態(tài)觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.了解放線菌、霉菌形態(tài)觀察的原理。

2.學(xué)習(xí)并掌握觀察放線菌、霉菌形態(tài)的操作方法。

3.初步了解放線菌、霉菌的形態(tài)特征。

二、實(shí)驗(yàn)原理

放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。常見(jiàn)放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)的叫基內(nèi)菌絲(簡(jiǎn)稱“基絲”)，基絲生長(zhǎng)到一定階段還能向空氣中生長(zhǎng)出氣生菌絲(簡(jiǎn)稱“氣絲”)，并進(jìn)一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。有的放線菌只產(chǎn)生基絲而無(wú)氣絲。在顯微鏡下直接觀察時(shí)，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲依種類的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生。

霉菌可產(chǎn)生復(fù)合分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長(zhǎng)到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態(tài)特征是識(shí)別不同種類霉菌的重要依據(jù)。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多，常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。人們?cè)O(shè)計(jì)了各種培養(yǎng)和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的形態(tài)特征。本實(shí)驗(yàn)采用插片法。

插片法：將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長(zhǎng)而附著在蓋玻上。觀察時(shí)，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長(zhǎng)期的形態(tài)。

三、試劑與器材

1.材料 黑曲霉、青霉和根霉，細(xì)黃鏈霉菌或青色鏈霉菌，滅菌的高氏I號(hào)瓊脂和滅菌的查氏培養(yǎng)基。

2.實(shí)驗(yàn)器材 經(jīng)滅菌的：平皿、玻璃紙、無(wú)菌吸管、蓋玻片、玻璃涂棒，以及載玻片、接種環(huán)、接種鏟、鑷子、顯微鏡等。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

倒平板→接種→插片→培養(yǎng)→鏡檢

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1.倒平板要厚一些，接種時(shí)劃線要密。

2.插片時(shí)要有一定角度并與劃線垂直。

3.觀察時(shí)，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當(dāng)視野，更換高倍鏡觀察。

4.如果用0.1%美藍(lán)對(duì)培養(yǎng)后的蓋玻片進(jìn)行染色后觀察，效果會(huì)更好。

實(shí)驗(yàn)六 革蘭氏染色及芽孢染色

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.了解革蘭氏染色法和芽孢染色法的原理，并掌握其操作方法。

2.了解革蘭氏染色法在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。

3.學(xué)習(xí)并掌握微生物涂片、染色的基本技術(shù)和無(wú)菌操作技術(shù)。

4.學(xué)習(xí)顯微鏡(油鏡)的使用方法。

5.初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征。

二、實(shí)驗(yàn)原理

革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結(jié)晶紫進(jìn)行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脫色，最后用復(fù)染劑(如番紅)復(fù)染。經(jīng)此方法染色后，細(xì)胞保留初染劑藍(lán)紫色的細(xì)菌為革蘭氏陽(yáng)性菌；如果細(xì)胞中初染劑被脫色劑洗脫而使細(xì)菌染上復(fù)染劑的顏色(紅色)，該菌屬于革蘭氏陰性菌。革蘭氏染色反應(yīng)是細(xì)菌重要的鑒別特征，為保證染色結(jié)果的正確性，采用規(guī)范的染色方法是十分必要的。

芽孢染色法的基本原理，用著色力強(qiáng)的染色劑孔雀綠或石炭酸復(fù)紅，在加熱條件下染色，使染料不僅進(jìn)入菌體也可進(jìn)入芽孢內(nèi)，進(jìn)入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)著色難以被水洗脫，當(dāng)用對(duì)比度大的復(fù)染劑染色后，芽孢仍保留初染劑的顏色，而菌體和芽孢囊被染成復(fù)染劑的顏色，使芽孢和菌體更易于區(qū)分。

三、試劑與器材

1.材料：枯草芽孢桿菌12～18h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，大腸桿菌約24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物

2.試劑 革蘭氏染色液(結(jié)晶紫液、碘液、95％乙醇、番紅液)。5％孔雀綠水溶液

3.實(shí)驗(yàn)器材 小試管、滴管、燒杯、試管架、濾紙、木夾子、載玻片、蓋玻片、凹載玻片、無(wú)菌水、顯微鏡等、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯)、擦鏡紙、生理鹽水等。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1.革蘭氏染色法 制片→初染→媒染→脫色→復(fù)染→鏡檢。

2.Schaefer-Fulton氏染色法 制片→染色→水洗→復(fù)染→水洗→鏡檢。

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1.涂片時(shí)，生理鹽水及取菌不宜過(guò)多，涂片應(yīng)盡可能均勻，

2.乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，嚴(yán)格掌握脫色時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)七 酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒定

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.觀察酵母菌的形態(tài)特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌與細(xì)菌形態(tài)特征的區(qū)別。

2.學(xué)習(xí)鑒別死活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

酵母菌是單細(xì)胞的真核微生物，菌體比細(xì)菌大而且不運(yùn)動(dòng)。酵母菌的繁殖方式分為無(wú)性繁殖和有性繁殖兩種，以無(wú)性繁殖為主。芽殖是酵母菌普遍的無(wú)性繁殖方式，少數(shù)為裂殖；有性繁殖是產(chǎn)生子囊和子囊孢子。本實(shí)驗(yàn)是通過(guò)美藍(lán)染液水浸片和水一碘液水浸片來(lái)觀察酵母的形態(tài)和芽殖方式。

美藍(lán)是一種無(wú)毒性的染料，它的氧化型呈藍(lán)色，還原型無(wú)色。用美藍(lán)對(duì)酵母活細(xì)胞染色時(shí)，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o(wú)色的還原型，而對(duì)代謝作用微弱或死細(xì)胞，無(wú)此還原能力或還原能力極弱，而被美藍(lán)染成藍(lán)色或淡藍(lán)色。因此，不僅用此法可觀察酵母細(xì)胞形態(tài)，也可用來(lái)鑒別酵母菌的死細(xì)胞和活細(xì)胞。

三、試劑與器材

1.材料 釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡爾酵母(Saccharomyces calsbergensis)培養(yǎng)2天左右的麥芽汁(或豆芽汁)液體培養(yǎng)物。

2.試劑 0.05％和O.1％呂氏堿性美藍(lán)染色液、革蘭氏染色用的碘液。

3.器材 顯微鏡、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、灑精燈等。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1.美藍(lán)浸片觀察 酵母培養(yǎng)→制片→染色→鏡檢→30分鐘后再鏡檢

2.水-碘浸片觀察

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1.染液不宜過(guò)多或過(guò)少，否則，在蓋上蓋玻片時(shí)，菌液溢出或出現(xiàn)大量氣泡。

2.用鑷子取一塊蓋玻片，先將一側(cè)與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下，使其蓋在菌液上，蓋玻片不宜平著放下，避免氣泡產(chǎn)生。

實(shí)驗(yàn)八 微生物直接計(jì)數(shù)法及測(cè)微技術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.了解血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)原理，并掌握計(jì)數(shù)方法。

2.掌握用測(cè)微尺測(cè)定微生物大小的方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將一定稀釋的菌體或孢子懸液注入血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室中，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡(jiǎn)便、快速、直觀的方法。因?yàn)橛?jì)數(shù)板是一塊特別的載玻片。其上由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)；中間較寬的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各刻有一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分為九個(gè)大方格，一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格(見(jiàn)圖2―3―44)；另一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格，無(wú)論哪種每個(gè)大方格中的小方格都是400個(gè)。每一個(gè)大方格邊長(zhǎng)為0．1mm，所以計(jì)數(shù)室的容積為0．1mm3。計(jì)數(shù)時(shí)，通常只用5個(gè)中格內(nèi)的菌體(孢子)數(shù)即可。然后求出每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，得出一個(gè)大方格中的總茵數(shù)，再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。若設(shè)5個(gè)中方格中總菌數(shù)為N，菌液稀釋倍數(shù)為M，如果是25個(gè)中方格計(jì)數(shù)板，則計(jì)算方法為：

lml菌液中的總菌數(shù)=平均每個(gè)中格中菌的個(gè)數(shù)×25×104×M=50000N?M(個(gè))

微生物細(xì)胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生物大小的測(cè)定，需要在顯微鏡下，借助于特殊的測(cè)量工具――測(cè)微尺，包括目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺。鏡臺(tái)測(cè)微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片，一般是將1mm等分為100格，每格長(zhǎng)0．01mm(即10pm)。鏡臺(tái)測(cè)微尺并不直接用來(lái)測(cè)量細(xì)胞的大小，而是用于校正目鏡測(cè)微尺每格的相對(duì)長(zhǎng)度。

三、試劑與器材

1.材料 釀酒酵母、藤黃微球菌和大腸桿菌的染色標(biāo)本片、釀酒酵母24h馬鈴薯斜面培養(yǎng)物。

2.實(shí)驗(yàn)器材 細(xì)胞計(jì)數(shù)板、顯微鏡、蓋玻片、無(wú)菌毛細(xì)滴管、目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺、載玻片、蓋玻片、顯微鏡等。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1.微生物直接計(jì)數(shù)法 菌懸液制備→鏡檢計(jì)數(shù)室→加樣品→顯微鏡計(jì)數(shù)→清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

2.微生物測(cè)微技術(shù) 裝目鏡測(cè)微尺→校正→菌體大小測(cè)定

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1.防止加樣空氣泡產(chǎn)生。

2.調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)。

實(shí)驗(yàn)九 大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.了解大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線特征和繁殖規(guī)律，并學(xué)會(huì)繪制生長(zhǎng)曲線。

2.復(fù)習(xí)光電比濁法測(cè)量細(xì)菌數(shù)量的方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

將一定量的細(xì)菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細(xì)胞要經(jīng)歷延遲期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)階段。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)或生長(zhǎng)速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱為該細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。不同的細(xì)菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長(zhǎng)曲線不同，同樣的細(xì)菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長(zhǎng)曲線也不相同。

三、試劑與器材

1.材料與試劑 大腸桿菌、LB液體培養(yǎng)基70ml、分裝2支大試管(5ml／支)、剩余60ml裝入250ml的三角瓶。

2.器材 722型分光光度計(jì)、恒溫振蕩搖床、無(wú)菌試管、無(wú)菌吸管等。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

編號(hào)→接種→培養(yǎng)→比濁測(cè)定

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1.測(cè)定OD值時(shí)，要求從低濃度到高濃度測(cè)定

2.嚴(yán)格控制培養(yǎng)時(shí)間

實(shí)驗(yàn)十 水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.學(xué)習(xí)水樣的采取方法和水樣細(xì)菌總數(shù)測(cè)定的方法。

2.了解水源水的平板菌落計(jì)數(shù)的原理。

二、實(shí)驗(yàn)原理

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用平板計(jì)數(shù)技術(shù)測(cè)定水中細(xì)菌總數(shù)。由于水中細(xì)菌種類繁多，它們對(duì)營(yíng)養(yǎng)和其他生長(zhǎng)條件的要求差別很大，不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下，使水中所有的細(xì)菌均能生長(zhǎng)繁殖，因此，以一定的培養(yǎng)基平板上生長(zhǎng)出來(lái)的菌落，計(jì)算出來(lái)的水中細(xì)菌總數(shù)僅是一種近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。

三、試劑與器材

1.試劑 牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，滅菌水

2.器材 滅菌三角瓶，滅菌的帶玻璃塞瓶，滅菌培養(yǎng)皿，滅菌吸管，滅菌試管等。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1.水樣的采取

2.細(xì)菌總數(shù)測(cè)定

3.菌落計(jì)數(shù)方法

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1.注意全過(guò)程防止染菌

實(shí)驗(yàn)十一 細(xì)菌細(xì)胞的生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

了解并掌握細(xì)菌鑒定中常用生理生化反應(yīng)的原理和方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

各種細(xì)菌由于具有不同的酶系統(tǒng)，致使它們能利用不同的底物，或雖然可以利用相同的底物，卻產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物，因此可以利用各種生理生化反應(yīng)來(lái)鑒別細(xì)菌。

糖發(fā)酵是最常用的生化反應(yīng)，存在于大多數(shù)細(xì)菌中。不同的細(xì)菌在糖的分解能力上存在很大的差異。有些細(xì)菌能分解某種糖并產(chǎn)生酸性物質(zhì)(如乳酸、丙酸、醋酸等)和氣體(如二氧化碳、氫、甲烷等)，而有些細(xì)菌只產(chǎn)生酸不產(chǎn)生氣體。例如大腸桿菌分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣，普通變形桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，但不能分解乳糖。酸的產(chǎn)生可利用指示劑來(lái)判斷。在培養(yǎng)基中加入溴甲酚紫(pH5．2為黃色，pH6．8為紫色)，當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí)，使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色。氣體的產(chǎn)生可由發(fā)酵試管中倒置的德漢氏小管中有無(wú)氣泡的出現(xiàn)來(lái)驗(yàn)證．

三、試劑與器材

1.材料大腸桿菌、普通變性桿菌、產(chǎn)氣桿菌、糖發(fā)酵培養(yǎng)基、蛋白胨水培養(yǎng)基、葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。

2.試劑甲基紅試劑、40％KOH、5％a一萘酚、乙醚、吲哚試劑。

3.實(shí)驗(yàn)器材德漢氏小管、試管、接種環(huán)、恒溫培養(yǎng)箱。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

培養(yǎng)基配制→編號(hào)→試管→接種→培養(yǎng)→觀察結(jié)果

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1.要嚴(yán)格按照培養(yǎng)基配方配制培養(yǎng)基。

2.觀察結(jié)果時(shí)要注意滴加藥量及反應(yīng)時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)十二 噬菌體的分離、純化及效價(jià)測(cè)定

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.學(xué)習(xí)分離、純化噬菌體的原理和方法

2.觀察噬菌斑的形態(tài)和大小

3.掌握噬菌體效價(jià)測(cè)定的基本方法

二、實(shí)驗(yàn)原理

噬菌體是細(xì)菌的專性寄生物，自然界中凡是有細(xì)菌存在的地方，均可以發(fā)現(xiàn)其特異性的噬菌體，噬菌體侵入細(xì)菌細(xì)胞后，利用宿主細(xì)胞的酶系統(tǒng)進(jìn)行復(fù)制和增殖，最終導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞裂解，噬菌體從細(xì)胞中釋放出來(lái)，可以進(jìn)一步侵染細(xì)菌細(xì)胞。在液體培養(yǎng)基中，噬菌體可以使渾濁的菌懸液變?yōu)槌吻?。在長(zhǎng)有宿主細(xì)菌的固體培養(yǎng)基平板上，噬菌體可以裂解細(xì)菌形成透明的空斑，即噬菌斑，一個(gè)噬菌體產(chǎn)生一個(gè)噬菌斑，因此可以利用這個(gè)性質(zhì)對(duì)噬菌體進(jìn)行分離和效價(jià)的測(cè)定。

噬菌體的效價(jià)是指噬菌體的濃度，即一毫升培養(yǎng)液中所含有的噬菌體數(shù)量。噬菌體效價(jià)的測(cè)定方法多采用雙層瓊脂平板法。先在培養(yǎng)皿中倒入底層固體培養(yǎng)基，凝固后再倒入含有宿主細(xì)菌和一定稀釋度噬菌體的半固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)一段時(shí)間后，計(jì)算噬菌斑的數(shù)量。

三、試劑與器材

1.材料大腸桿菌、牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨半固體培養(yǎng)基(含有瓊脂0．5％，試管分裝，每管3～5m1)、三倍濃縮的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基。

2.器材培養(yǎng)皿、無(wú)菌吸管、三角瓶、抽濾瓶、蔡氏細(xì)菌濾器、真空泵、陰溝污水。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

噬菌體分離→噬菌體純化→效價(jià)測(cè)定

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1.噬菌體時(shí)要注意細(xì)菌濾器的型號(hào)。

2.純化噬菌體時(shí)要注意形態(tài)、大小。

3.效價(jià)測(cè)定時(shí)要注意雙層瓊脂平板法的使用技巧。

微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

將菌種種在無(wú)菌的培養(yǎng)基上，環(huán)境要做到無(wú)菌，避免雜菌污染。

不同的微生物需要不同的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

你好，首先你要明確想要培養(yǎng)哪一種微生物，通過(guò)了解樣品微生物的性質(zhì)。

通常我們都是用特定的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)微生物的，要配置相應(yīng)的培養(yǎng)基，也可以在網(wǎng)上購(gòu)買。

在無(wú)菌條件下接入目標(biāo)微生物到培養(yǎng)基（固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基等）。放入培養(yǎng)箱，將溫度等條件調(diào)到適合其生長(zhǎng)環(huán)境培養(yǎng)即可。

如果不明確可以提問(wèn)的