1. SNP燕窩面膜

snp燕窩面膜沒有添加劑的成分，為純天然成分，辨別snp燕窩面膜真假有以下方法：

1、包裝顏色的區(qū)別

正品SNP燕窩水庫面膜主要是藍(lán)白色，在光線的照射下反光性比較好。假冒的SNP燕窩水庫面膜就顯得顏色比較暗淡，反光性基本沒有。

2、袋子外形特點(diǎn)

正品SNP燕窩水庫面膜袋子邊緣四角為圓角，袋子中間無任何打孔。假冒的SNP燕窩水庫面膜袋子邊緣四角為四角，袋子snp商標(biāo)上面有圓形打孔。

3、細(xì)節(jié)處理

正品SNP燕窩水庫面膜袋子撕口光滑呈類似三角形，這種樣式是為了讓面膜袋子比較容易撕開，產(chǎn)品說明與背景區(qū)別很明顯，假冒的SNP燕窩水庫面膜袋子撕口粗糙呈半個(gè)橢圓形，這種撕口就比較難撕了，面膜袋子背景與產(chǎn)品說明字體較為暗淡。

4、產(chǎn)品批號(hào)和保質(zhì)期的打印方法

正品SNP燕窩水庫面膜的批號(hào)和保質(zhì)期是直接鋼印打印在袋子背部下沿。假冒的SNP燕窩水庫面膜是直接噴墨或者通過打印機(jī)點(diǎn)陣打印的。

2. SNP燕窩面膜功效

該款海洋燕窩補(bǔ)水精華面膜含有主要功效成分：10種（甘油、丁二醇、甜菜堿、小雨燕窩提取物、積雪草(CENTELLA ASIATICA)提取物、茶(CAMELLIA SINENSIS)葉提取物、北美金縷梅(HAMAMELIS VIRGINIANA)樹皮/葉/嫩枝提取物、神經(jīng)酰胺 3、白花春黃菊(ANTHEMIS NOBILIS)花提取物、透明質(zhì)酸鈉）

該款海洋燕窩補(bǔ)水精華面膜含有保濕成分：7種（甘油、丁二醇、甜菜堿、積雪草(CENTELLA ASIATICA)提取物、茶(CAMELLIA SINENSIS)葉提取物、神經(jīng)酰胺 3、透明質(zhì)酸鈉）

該款海洋燕窩補(bǔ)水精華面膜含有抗氧化成分：4種（積雪草(CENTELLA ASIATICA)提取物、茶(CAMELLIA SINENSIS)葉提取物、神經(jīng)酰胺 3、白花春黃菊(ANTHEMIS NOBILIS)花提取物）

該款海洋燕窩補(bǔ)水精華面膜含有抗衰成分：4種（小雨燕窩提取物、茶(CAMELLIA SINENSIS)葉提取物、神經(jīng)酰胺 3、透明質(zhì)酸鈉）

該款海洋燕窩補(bǔ)水精華面膜含有舒敏成分：3種（積雪草(CENTELLA ASIATICA)提取物、北美金縷梅(HAMAMELIS VIRGINIANA)樹皮/葉/嫩枝提取物、神經(jīng)酰胺 3）

該款海洋燕窩補(bǔ)水精華面膜含有抗炎成分：2種（積雪草(CENTELLA ASIATICA)提取物、白花春黃菊(ANTHEMIS NOBILIS)花提取物）

該款海洋燕窩補(bǔ)水精華面膜含有美白祛斑成分：2種（積雪草(CENTELLA ASIATICA)提取物、茶(CAMELLIA SINENSIS)葉提取物）

該款海洋燕窩補(bǔ)水精華面膜含有祛痘成分：1種（北美金縷梅(HAMAMELIS VIRGINIANA)樹皮/葉/嫩枝提取物）

3. SNP燕窩面膜天天敷

會(huì)買這個(gè)面膜就是因?yàn)樗麄冞@個(gè)是一次性包裝的，會(huì)更加衛(wèi)生一些，以前用的睡眠面膜都是灌裝的，存放時(shí)間長(zhǎng)了，也擔(dān)心有細(xì)菌什么的，這個(gè)是一次性設(shè)計(jì)的，用起來很方便，燕窩原液真的讓皮膚補(bǔ)水夠夠的。

4. snp燕窩面膜怎么樣

挺好的。

 snp是韓國(guó)的一個(gè)藥妝品牌，專門生產(chǎn)面膜，是韓國(guó)的藥妝品牌，在韓國(guó)和國(guó)內(nèi)的銷量都很不錯(cuò)，是用來補(bǔ)水保濕的一個(gè)好選擇。snp面膜的材質(zhì)輕薄，服帖度高，精華液豐富卻不會(huì)滴落，敷完后略有粘稠感，總的來說使用感還不錯(cuò)。snp的燕窩面膜是王牌產(chǎn)品，動(dòng)物面膜則以其高顏值吸引了大批粉絲，很多明星都在用哦。

5. SNP燕窩面膜是械字號(hào)的嗎?

snp是韓國(guó)的一款面膜，韓國(guó)面膜一般保質(zhì)期在2-3年之間，在包裝的尾部都有鋼印打制的面膜到期時(shí)間。用的時(shí)候一定要看看啊，不要用到過期的產(chǎn)品。

6. snp燕窩面膜成分

會(huì)買這個(gè)面膜就是因?yàn)樗麄冞@個(gè)是一次性包裝的，會(huì)更加衛(wèi)生一些，以前用的睡眠面膜都是灌裝的，存放時(shí)間長(zhǎng)了，也擔(dān)心有細(xì)菌什么的，這個(gè)是一次性設(shè)計(jì)的，用起來很方便，燕窩原液真的讓皮膚補(bǔ)水夠夠的。

7. SNP燕窩面膜多少錢

snp燕窩面膜好用

這款海洋燕窩面膜就是非常適合日常補(bǔ)水的面膜，它最主要的功效就是補(bǔ)水保濕長(zhǎng)效鎖水，SNP的燕窩面膜絕對(duì)是每天能夠敷的起的，每片面膜中都含有金絲燕窩精華原液以及玻尿酸精華，補(bǔ)水效果沒得說，肌膚干燥缺水的寶寶一定要試試。

這款SNP-海洋燕窩面膜主打補(bǔ)水保濕，美白提亮。所以特別推薦那些皮膚干燥、膚色不均勻、敏感的肌膚使用。面膜紙很服帖，精華也挺多，膚是個(gè)是需要時(shí)間的，也不是說你用它就會(huì)一下子效果就出來，那是不可能滴，所以想要皮膚好的寶貝們一定要堅(jiān)持一周兩到三次面膜。

8. SNP燕窩面膜 雜質(zhì)

一般來講，進(jìn)行real-time qPCR MasterMix都是2×的濃縮液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR靈敏度高，所以每個(gè)樣品至少要做3個(gè)平行孔，以防在后面的數(shù)據(jù)分析中，由于Ct相差較多或者SD太大，無法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。通常來講，反應(yīng)體系的引 物終濃度為100-400mM；模板如果是總RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情況下是1ul或者1ul的10倍稀釋液，要根據(jù)目的基因 的表達(dá)豐度進(jìn)行調(diào)整。當(dāng)然這些都是經(jīng)驗(yàn)值，在操作過程中，還需要根據(jù)所用MasterMix，模板和引物的不同進(jìn)行優(yōu)化，達(dá)到一個(gè)最佳反應(yīng)體系。在反應(yīng)體 系配置過程中，有下面幾點(diǎn)需要注意：

1. MasterMix不要反復(fù)凍融，如果經(jīng)常使用，最好溶解后放在4度。

2. 更多的配制Mix進(jìn)行，減少加樣誤差。最好能在冰上操作。

3. 每管或每孔都要換新槍頭！不要連續(xù)用同一個(gè)槍頭加樣！

4. 所有成分加完后，離心去除氣泡。

5. 每個(gè)樣品至少3個(gè)平行孔。

參比或者校正染料（reference dye，passive dye）常用的是ROXTM（現(xiàn)在已經(jīng)是ABI的注冊(cè)商標(biāo)了！）或者其他染料，只要不影響檢測(cè)PCR產(chǎn)物的熒光值就可以。參比染料的作用是標(biāo)準(zhǔn)化熒光定量 反應(yīng)中的非PCR震蕩，校正加樣誤差或者是孔與孔之間的誤差，提供一個(gè)穩(wěn)定的基線?，F(xiàn)在很多公司已經(jīng)把ROXTM配制在MasterMix或者 Premixture里。如果反應(yīng)曲線良好或已經(jīng)優(yōu)化好反應(yīng)體系，也可以不加ROXTM染料校正。

通常來講，real-time qPCR的反應(yīng)程序不需要像常規(guī)的PCR那樣，要變性、退火、延伸3步。由于其產(chǎn)物長(zhǎng)度在80-150bp 之間，所以只需要變性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR擴(kuò)增程序結(jié)束后，加一個(gè)溶解程序，來形成溶解曲線，判斷PCR產(chǎn)物的特 異性擴(kuò)增。而溶解程序，儀器都有默認(rèn)設(shè)置，或稍有不同，但都是一個(gè)在產(chǎn)物進(jìn)行溶解時(shí)候，進(jìn)行熒光信號(hào)的收集。

3. 儀器設(shè)置

所有儀器的操作都基本一致。設(shè)置的時(shí)候包括反應(yīng)板設(shè)置（plate setup）和程序設(shè)置（program setup）。我們以 ABI StepOne為例，詳細(xì)看一下反應(yīng)設(shè)置：

A. 首先是實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇：定量還是其他。我們命名為“BioTeke”，進(jìn)行“定量”實(shí)驗(yàn)。

B. 實(shí)驗(yàn)方法的選擇：我們選用的比較Ct的SYBR Green方法， Fast程序，以cDNA為模板進(jìn)行。

C. 目的基因的設(shè)置：有幾個(gè)目的基因和目的基因的名稱。

D. 樣品的設(shè)置：包括哪個(gè)是實(shí)驗(yàn)組，哪個(gè)是對(duì)照組。以及負(fù)對(duì)照的設(shè)置和生物重復(fù)的設(shè)置。

E. 對(duì)照組和內(nèi)參基因的設(shè)置：這個(gè)是為后面的定量做準(zhǔn)備

F. 反應(yīng)程序的設(shè)置：PCR反應(yīng)程序的設(shè)置要根據(jù)不同公司的MasterMix。比如BioTeke的95℃ 2分鐘就可以激活DNA聚合酶（ABI的需要10 分鐘）。循環(huán)反應(yīng)是95℃15秒，60℃15秒的40個(gè)循環(huán)。溶解曲線程序采用儀器默認(rèn)設(shè)置就可以?；蛘呤莾x器說明書上建議的程序。

G. 反應(yīng)體系的設(shè)置：

A-G這五個(gè)步驟簡(jiǎn)單設(shè)置好，可以保存，修改反應(yīng)程序或者立刻進(jìn)行反應(yīng)。

需要注意一點(diǎn)ABI儀器需要加ROX參比染料，默認(rèn)的是ROX。有些公司是把ROX或者其他染料配制在MasteMix里面；也有的是單獨(dú)分開。要根據(jù)不 同公司的MasterMix進(jìn)行這一個(gè)步驟的選擇。BioTeke的MasterMix里沒有參比染料，所以選擇“none”。

設(shè)置好之后，就可以把配置好的PCR管放進(jìn)儀器，點(diǎn)擊RUN！

五、Real-time qPCR數(shù)據(jù)分析

1. Real-time qPCR常見參數(shù)

基線（baseline）

通常是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)

同一次反應(yīng)中針對(duì)不同的基因需單獨(dú)設(shè)置基線

閾值（threshold）

自動(dòng)設(shè)置是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍

手動(dòng)設(shè)置：置于指數(shù)擴(kuò)增期，剛好可以清楚地看到熒光信號(hào)明顯增強(qiáng)。

同一次反應(yīng)中針對(duì)不同的基因可單獨(dú)設(shè)置閾值，但對(duì)于同一個(gè)基因擴(kuò)增一定要用同一個(gè)閾值。

Ct值:與起始濃度的對(duì)數(shù)成線性關(guān)系。

分析定量時(shí)候一般取Ct:15-35。太大或者太小都會(huì)導(dǎo)致定量的不準(zhǔn)確。

Rn（Normalized reporter）是熒光報(bào)告基團(tuán)的熒光發(fā)射強(qiáng)度與參比染料的熒光發(fā)射強(qiáng)度的比值。

△Rn：△Rn是Rn扣除基線后得到的標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果（△Rn=Rn-基線）。

2.影響Ct值的關(guān)鍵因素

模板濃度

模板濃度是決定Ct的最主要因素?？刂圃谝粋€(gè)合適范圍內(nèi)，使Ct在15-35之間。

反應(yīng)液成分的影響

任何分子的熒光發(fā)射都受環(huán)境因素影響----比如溶液的pH值和鹽濃度。

PCR反應(yīng)的效率

PCR反應(yīng)的效率也會(huì)影響Ct值。在PCR擴(kuò)增效率低的條件下進(jìn)行連續(xù)梯度稀釋擴(kuò)增，與PCR擴(kuò)增效率高的條件下相比，可能會(huì)所產(chǎn)生斜率不同的標(biāo)準(zhǔn)曲線。PCR效率取決于實(shí)驗(yàn)、反應(yīng)混合液性能和樣品質(zhì)量。一般說來，反應(yīng)效率在90-110%之間都是可以接受的。

3. 如何評(píng)估實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)的效果

PCR擴(kuò)增效率：為了正確地評(píng)估PCR擴(kuò)增效率，至少需要做3次平行重復(fù)，至少做5個(gè)數(shù)量級(jí)倍數(shù)(5logs)連續(xù)梯度稀釋模板濃度。

常見問題

1. 無Ct值出現(xiàn)

檢測(cè)熒光信號(hào)的步驟有誤: 一般SG法采用72℃延伸時(shí)采集，Taqman法則一般在退火結(jié)束時(shí)或延伸結(jié)束采集信號(hào)。

引物或探針降解: 可通過PAGE電泳檢測(cè)其完整性。

模板量不足: 對(duì)未知濃度的樣品應(yīng)從系列稀釋樣本的最高濃度做起。

模板降解: 避免樣品制備中雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況。

2. Ct值出現(xiàn)過晚（Ct>38）

擴(kuò)增效率低: 反應(yīng)條件不夠優(yōu)化。設(shè)計(jì)更好的引物或探針；改用三步法進(jìn)行反應(yīng)；適當(dāng)降低退火溫度；增加鎂離子濃度等。

PCR各種反應(yīng)成分的降解或加樣量的不足。

PCR產(chǎn)物太長(zhǎng): 一般采用80-150bp的產(chǎn)物長(zhǎng)度。

3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系不佳

加樣存在誤差: 使得標(biāo)準(zhǔn)品不呈梯度。

標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)降解: 應(yīng)避免標(biāo)準(zhǔn)品反復(fù)凍融，或重新制備并稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。

引物或探針不佳: 重新設(shè)計(jì)更好的引物和探針。

模板中存在抑制物，或模板濃度過高

4. 負(fù)對(duì)照有信號(hào)

引物設(shè)計(jì)不夠優(yōu)化：應(yīng)避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)。

引物濃度不佳：適當(dāng)降低引物的濃度，并注意上下游引物的濃度配比。

鎂離子濃度過高：適當(dāng)降低鎂離子濃度，或選擇更合適的mix試劑盒。

模板有基因組的污染：RNA提取過程中避免基因組DNA的引入，或通過引物設(shè)計(jì)避免非特異擴(kuò)增。

5. 溶解曲線不止一個(gè)主峰

引物設(shè)計(jì)不夠優(yōu)化：應(yīng)避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)。

引物濃度不佳：適當(dāng)降低引物的濃度，并注意上下游引物的濃度配比。

鎂離子濃度過高：適當(dāng)降低鎂離子濃度，或選擇更合適的 mix 試劑盒。

模板有基因組的污染：RNA提取過程中避免基因組DNA的引入，或通過引物設(shè)計(jì)避免非特異擴(kuò)增。

6. 擴(kuò)增效率低

反應(yīng)試劑中部分成分特別是熒光染料降解。

反應(yīng)條件不夠優(yōu)化：可適當(dāng)降低退火溫度或改為三步擴(kuò)增法。

反應(yīng)體系中有PCR反應(yīng)抑制物：一般是加入模板時(shí)所引入，應(yīng)先把模板適度稀釋，再加入反應(yīng)體系中，減少抑制物的影響。

7. 同一試劑在不同儀器上產(chǎn)生不同的曲線，如何判斷？

判斷標(biāo)準(zhǔn)：擴(kuò)增效率，靈敏度，特異性

如果擴(kuò)增效率在90%-110%，都是特異性擴(kuò)增，都可以把數(shù)據(jù)用于分析。

8. 擴(kuò)增曲線的異常？比如“S”型曲線？

參比染料設(shè)定不正確(MasterMix不加參比染料時(shí)，選NONE)

模板的濃度太高或者降解

熒光染料的降解

熒光定量PCR問題匯總

1. 定量PCR儀的開關(guān)機(jī)順序是怎樣的？

　　按照正確的開關(guān)機(jī)順序操作，有助于延長(zhǎng)儀器的使用壽命，減少儀器出故障的頻率。

　　開機(jī)順序：先開電腦，待電腦完全啟動(dòng)后再開啟定量PCR儀主機(jī)，等主機(jī)面板上的綠燈亮后即可打開定量PCR的收集軟件，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

　　關(guān)機(jī)順序：確認(rèn)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)結(jié)束后，首先關(guān)閉信號(hào)收集軟件，然后關(guān)掉定量PCR儀主機(jī)的電源，最后關(guān)閉電腦。

2. 哪些種類的反應(yīng)管和蓋子適合定量PCR實(shí)驗(yàn)使用？有何需要注意的地方？ 　　

　　定量PCR實(shí)驗(yàn)可以使用以下耗材：96孔光學(xué)反應(yīng)板配合光學(xué)膜，0.2 ml光學(xué)八聯(lián)反應(yīng)管配合光學(xué)膜，0.2 ml光學(xué)八聯(lián)反應(yīng)管配合平蓋的光學(xué)八聯(lián)管蓋。ABI公司生產(chǎn)的定量PCR耗材的具體使用方法和貨號(hào)見下表：

3. 為什么要定期對(duì)電腦進(jìn)行磁盤碎片整理？怎樣整理？

　 　當(dāng)運(yùn)行實(shí)時(shí)定量PCR儀及使用軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，計(jì)算機(jī)會(huì)刪除并創(chuàng)建若干文件，計(jì)算機(jī)硬盤的空閑空間會(huì)被分割成越來越多的小塊。當(dāng)硬盤驅(qū)動(dòng)器上文件以 分解的碎片存儲(chǔ)時(shí)，程序需要更長(zhǎng)的時(shí)間才能存取文件，因?yàn)楸仨毝啻螌ふ椅募槠源嫒〔煌钠瑪?。碎片整理?shí)用程序?qū)⒁粋€(gè)文件分解開的多個(gè)碎片合并在一 起，并存儲(chǔ)到硬盤的同一個(gè)位置，從而清除文件碎片，進(jìn)而優(yōu)化系統(tǒng)性能。

碎片整理的方法如下：

　　· 在Windows桌面上，選擇開始(start)，我的電腦(My computer)。

　　· 在(我的電腦)窗口中，用鼠標(biāo)右鍵單擊硬盤驅(qū)動(dòng)器，并選擇(屬性)property。

　　· 在(屬性)對(duì)話框中選擇工具(Tools)選項(xiàng)卡，單擊開始整理(Defragment now)。

　　· 單擊碎片整理(Defragment)。

　　· 當(dāng)顯示“碎片整理完畢”對(duì)話框時(shí)，單擊（確定）。

　　· 在“本地磁盤屬性”對(duì)話框中，單擊（確定）。

　　· 為計(jì)算機(jī)機(jī)中剩余的驅(qū)動(dòng)器重復(fù)如上步驟。

4. 何時(shí)執(zhí)行windows service pack更新？

　 　不要執(zhí)行該操作。除非美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司代表通知您更新操作系統(tǒng)，否則請(qǐng)不要更新控制定量PCR 儀的計(jì)算機(jī)的操作系統(tǒng)。新版本的Microsoft Windows操作系統(tǒng)有可能與SDS 軟件存在沖突，并導(dǎo)致儀器不能正常運(yùn)行。如果您希望安裝service pack（更新包）以更新操作系統(tǒng)，應(yīng)查看隨SDS 軟件提供的版本說明，避免兼容性問題。

5. 應(yīng)該備份哪些數(shù)據(jù)？

　　應(yīng)該定期備份您的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，備份頻率推薦每周一次，用光盤刻錄。同時(shí)您也應(yīng)該備份定量PCR儀的各種純熒光光譜校正文件、背景文件和安裝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，這些文件所在的目錄是C:/Appliedbiosystems/SDS Document。下圖是校正文件的樣本。

6.怎么樣的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境才能保證儀器設(shè)備正常運(yùn)行？

　　良好的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境有助于延長(zhǎng)儀器的使用壽命，減少儀器出故障的頻率。推薦做到以下幾個(gè)方面：

　　電源：推薦配備合適的UPS或穩(wěn)壓器。

　　通風(fēng)：儀器的通風(fēng)應(yīng)該沒有阻擋。

　　溫度：推薦實(shí)驗(yàn)室配備空調(diào)，溫度應(yīng)該控制在10-30°C之間。

　　濕度：20-80%；對(duì)于潮濕的省份，推薦實(shí)驗(yàn)室配備除濕機(jī)。

　　空間：易于操作，安全。

7. 怎樣判斷定量pcr儀的樣本加熱塊是否被污染？怎樣清除污染？

　　一個(gè)辦法是運(yùn)行背景校正反應(yīng)板，當(dāng)一個(gè)或多個(gè)反應(yīng)孔連續(xù)顯示出不正常的高信號(hào)，則表明該孔可能被熒光污染物。

　　另外一種辦法是在不放任何物品到樣本塊上的前提下，執(zhí)行ROI的校正，當(dāng)某個(gè)孔的信號(hào)明顯高出其他孔時(shí)，則表明該孔被污染。

清除樣本加熱塊污染的步驟如下：

　　用移液器吸取少量乙醇并滴入每個(gè)污染的反應(yīng)孔中。

　　吹打數(shù)次。

　　將廢液吸入廢液杯中。

　　重復(fù)以上步驟：乙醇三次，去離子水三次。

　　確認(rèn)反應(yīng)孔中的殘留液體蒸發(fā)完。

8. 什么是背景校正？多長(zhǎng)時(shí)間執(zhí)行一次背景校正？

　 　背景校正程序測(cè)量定量PCR儀所使用的反應(yīng)管和水的空白熒光強(qiáng)度。在運(yùn)行校正程序期間，定量PCR儀在10分鐘內(nèi)連續(xù)讀取背景校正板的熒光強(qiáng)度，信號(hào)收 集的溫度為60°C。隨后，SDS軟件計(jì)算所收集到的熒光強(qiáng)度的平均值，提取結(jié)果并保存到校正文件中。軟件在今后的分析中將自動(dòng)調(diào)用此校正文件，從實(shí)驗(yàn)數(shù) 據(jù)中扣除背景信號(hào)。

　　因?yàn)楸尘盁晒獾男盘?hào)強(qiáng)度隨著許多外界因素（比如外來的污染、反應(yīng)板/反應(yīng)管的生產(chǎn)廠商不同、水的純度等）而變化，所以推薦定期進(jìn)行背景校正，一般每三個(gè)月到半年校正一次。

9. 什么是純熒光校正？多長(zhǎng)時(shí)間校正一次？

　純熒光校正是測(cè)定各種純熒光染料標(biāo)準(zhǔn)品的波長(zhǎng)和信號(hào)強(qiáng)度，通俗地說是讓儀器“認(rèn)識(shí)”各種熒光染料。軟件收集并儲(chǔ)存各種純熒光染料標(biāo)準(zhǔn)品的熒光信息。以后 每次定量實(shí)驗(yàn)運(yùn)行過程中，SDS軟件收集樣品的原始光譜信號(hào)，并將此原始光譜與純熒光文件中的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，精確扣除不同染料的信號(hào)重疊部分，從而確定樣 品中的熒光染料種類和信號(hào)強(qiáng)度。

　　推薦每半年進(jìn)行一次純熒光校正。在運(yùn)行光譜校正之前，請(qǐng)先進(jìn)行背景校正和ROI校正。

10.96孔板怎樣封膜？

　　當(dāng)使用96孔板做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，推薦使用光學(xué)膜代替蓋子來密封反應(yīng)孔。正確的封膜方法是：先沿著96孔板的縱向壓膜，然后橫向，最后沿著板的邊緣按壓使之密封。

11.使用單管或8連管做實(shí)驗(yàn)時(shí)，在樣品加熱塊上應(yīng)該怎樣安排放置？

　 　使用單管或8連管做實(shí)驗(yàn)，并且樣本數(shù)量不多的時(shí)候，建議在樣品加熱塊(TRAY)上對(duì)稱地安放樣品，最好是縱向放置，并且優(yōu)先放在第6列或第7列，然后 逐漸向兩邊放置。這樣做的好處是熱蓋壓下來的時(shí)候不至于發(fā)生傾斜，各個(gè)反應(yīng)管的受力和受熱都比較均勻，提高孔與孔之間的數(shù)據(jù)精密性.

12. 絕對(duì)定量與相對(duì)定量有什么區(qū)別？

　　絕對(duì)定量的目的是測(cè)定目的基因在樣本中的分子數(shù)目，即通常所說的拷貝數(shù)。相對(duì)定量的目的是測(cè)定目的基因在兩個(gè)或多個(gè)樣本中的含量的相對(duì)比例，而不需要知道它們?cè)诿總€(gè)樣本中的拷貝數(shù)。

　　舉例來說，如果研究項(xiàng)目中包括處理過的和未經(jīng)處理的對(duì)照樣本，通?？梢詫⑽唇?jīng)處理的樣本指定為基準(zhǔn)，規(guī)定其目的基因濃度為100%，將經(jīng)處理的樣本的定量結(jié)果除以對(duì)照樣品的定量結(jié)果，就可以計(jì)算各個(gè)處理樣本的基因含量相對(duì)于未處理樣品的百分比。

　　絕對(duì)定量實(shí)驗(yàn)必須使用已知拷貝數(shù)的絕對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品，必須做標(biāo)準(zhǔn)曲線。相對(duì)定量可以做標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可以不做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　 　相對(duì)定量實(shí)驗(yàn)有兩種方法：標(biāo)準(zhǔn)曲線法和CT值比較法。如果使用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，可以使用絕對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品，也可以使用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品，而且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品在實(shí)驗(yàn)操作上更為 簡(jiǎn)便易行。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品是只知道樣品中DNA或RNA的稀釋比例而不需要知道其分子數(shù)目的標(biāo)準(zhǔn)品，典型的做法是將一個(gè)已知pg數(shù)的樣品做一系列梯度稀釋。

　　 CT值比較法是利用CT值與起始DNA濃度的對(duì)數(shù)成反比的數(shù)學(xué)關(guān)系，來計(jì)算不同樣本之間的相對(duì)百分比，其計(jì)算公式是。

　　絕對(duì)定量的數(shù)據(jù)易于理解，但是絕對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品的制備和測(cè)定其DNA含量比較困難。有許多商業(yè)性的標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒供選購(gòu)，可以解決這種困難。

　　相對(duì)定量的標(biāo)準(zhǔn)品容易在實(shí)驗(yàn)室里自己制備，但是數(shù)據(jù)處理比較麻煩，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的解釋有一定難度。

13. 定量PCR基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)該如何處理？

　　總的來說，有三個(gè)層次的校正是必須要做的。

　 　首先，參比信號(hào)校正。試劑中必須包含固定濃度的ROX，這樣由于反應(yīng)總體積的差異、所在孔的位置不同、試管壁的厚度差異、管蓋透光性能的差異等所引起的 熒光信號(hào)波動(dòng)都能夠被扣除，使數(shù)據(jù)真正反映PCR進(jìn)程。ROX校正能夠極大地改進(jìn)定量的精確度，提高重復(fù)管之間的數(shù)據(jù)重現(xiàn)性。

　 　其次，內(nèi)對(duì)照校正。實(shí)驗(yàn)中加入樣品基本上都是以體積為單位的，但是同樣體積的不同樣品很可能來自不同數(shù)目的細(xì)胞，所以將實(shí)驗(yàn)結(jié)果校正到每個(gè)細(xì)胞的含量是 必要的。方法是在定量目的基因（如IL-2）的同時(shí)定量一個(gè)內(nèi)對(duì)照基因（如18S RNA基因），然后IL-2/18S。內(nèi)對(duì)照校正使不同樣品的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以相互比較。

　　第三，計(jì)算相對(duì)于基準(zhǔn)樣品(Calibrator)的相對(duì)基因含量。比如研究處理和未處理的、0小時(shí)和6小時(shí)的、正常和患病的之間的基因表達(dá)的差別，則需要計(jì)算處理/未處理、6小時(shí)/0小時(shí)、患病/正常。

14. 標(biāo)準(zhǔn)曲線法相對(duì)定量的數(shù)據(jù)應(yīng)該怎么處理？

　　假設(shè)實(shí)驗(yàn)的目標(biāo)是研究藥物處理后0、24、48小時(shí)IL-2基因在某種組織中的表達(dá)量的變化，所用的內(nèi)對(duì)照是18S RNA基因。IL-2和18S RNA的測(cè)定結(jié)果都是總RNA的pg數(shù)，數(shù)據(jù)的處理方法見下表：

15.什么是CT值比較法？數(shù)據(jù)怎么處理？

　　CT值與起始DNA濃度的對(duì)數(shù)成反比：

　 　如果(1)不同管之間的PCR反應(yīng)效率相同；(2)這些PCR的反應(yīng)效率接近100%，可以從上面的公式推出相對(duì)含量(X01/X02) = 2 -ΔΔCT。假設(shè)實(shí)驗(yàn)的目標(biāo)是研究藥物處理后0、24、48小時(shí)IL-2基因在某種組織中的表達(dá)量的變化，所用內(nèi)對(duì)照是18S RNA基因。IL-2和18S RNA的測(cè)定結(jié)果都是CT值，而沒有通過標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定總RNA的pg數(shù)?！　　　　?/p>

16. 每個(gè)反應(yīng)管中可以加入多少種探針？

　 每個(gè)反應(yīng)管中可以加入的探針數(shù)目，取決于儀器、軟件、試劑和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)等幾個(gè)方面。

　 　首先是儀器的硬件構(gòu)成和軟件的解析能力。在軟件解析能力足夠的前提下，全波長(zhǎng)檢測(cè)的定量PCR儀如激光管-CCD類型對(duì)于探針的數(shù)量實(shí)際上是沒有限制 的。如果信號(hào)的采集要通過濾色片，那么探針的數(shù)量取決于濾色片的數(shù)目，增加探針需要增加或改變?yōu)V色片。改動(dòng)儀器的結(jié)構(gòu)通常很困難。以AB公司的儀器為 例，7900和7700是激光-全波長(zhǎng)檢測(cè)的，7000、7300是4色濾色片的，7500是5色濾色片的。

　 　其次是化學(xué)上的可能性。不同的熒光基團(tuán)要組合到一起，在同一反應(yīng)管內(nèi)使用，必須其激發(fā)波長(zhǎng)既相對(duì)靠近又不能靠得太近，既保證信號(hào)激發(fā)的效率又保證信號(hào)不 重疊干擾，能夠區(qū)分清楚。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的熒光基團(tuán)種類有限，滿足這樣條件的分子組合更少。目前的最佳組合只能達(dá)到每組4到5種熒光的水平。

　 　第三是實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)和選用的探針類型。定量PCR實(shí)驗(yàn)必須使用ROX校正熒光，占去一種熒光；TaqMan探針的淬滅基團(tuán)(TAMRA)也要占用一種 熒光，對(duì)于4色檢測(cè)的儀器來說，只剩下2種熒光可以標(biāo)記探針，對(duì)于5色檢測(cè)的儀器還有3種熒光可以使用。如果將探針改用TaqMan MGB探針，由于它的淬滅基團(tuán)是不發(fā)熒光的，比之TaqMan探針就可以多1種熒光用于標(biāo)記探針。如果實(shí)驗(yàn)要求不高，不做ROX校正（AB公司不推薦這樣 做），還可以再多一種熒光用于標(biāo)記探針。

　　第四是研究應(yīng)用本身的要求。如果研究SNP和基因突變，因?yàn)榻^大多數(shù)人類基因是2態(tài)的，只存在兩種等位基因，2條探針已經(jīng)足夠。如果研究基因表達(dá)，通常是兩兩比較居多，比如處理比未處理，正常比異常等，加上一個(gè)內(nèi)對(duì)照，3色也就足夠了。

　 　最后是成本控制方面的要求。多重定量的目的一是提高數(shù)據(jù)精確度，二是節(jié)省反應(yīng)成本。同時(shí)測(cè)定的基因越多，成本也越低。但是加入4-5種探針，就要同時(shí)加 入8-10條引物。在引物設(shè)計(jì)的時(shí)候要考慮到盡量減少這些引物之間的競(jìng)爭(zhēng)和抑制等多種干擾，平衡各對(duì)引物之間的PCR效率。雖然這是可以做到的，但是要花 費(fèi)大量時(shí)間、人力和物力來篩選最佳引物組合、優(yōu)化反應(yīng)條件。如果實(shí)驗(yàn)規(guī)模不大，在總體上可能反而不合算。

　　在實(shí)際應(yīng)用中，不是單純追求加入的探針越多越好，而是追求總體效益的最優(yōu)化。比較切合實(shí)際的是2到3重反應(yīng)，引物和探針的設(shè)計(jì)不太困難，反應(yīng)條件的優(yōu)化也不太麻煩，同時(shí)降低了成本。

17. 等位基因鑒定實(shí)驗(yàn)（比如SNP分型）是定性的研究，是否可以不進(jìn)行ROX熒光校正？

不，等位基因鑒定實(shí)驗(yàn)也要進(jìn)行ROX熒光歸一，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精密可靠。

　　由于試劑加樣操作的誤差、離心管熱量傳遞的誤差、離心管蓋透光性能的誤差等偶然因素是不可避免的，必然導(dǎo)致熒光激發(fā)效率的差異，因此儀器收集到的原始信號(hào)必須進(jìn)行歸一化校正，相互之間才可以比較并保證重現(xiàn)性。

　　這種校正是通過在反應(yīng)緩沖液中添加ROX校正熒光來實(shí)現(xiàn)的。ROX在反應(yīng)緩沖液中的濃度是固定的，因此其信號(hào)的高低變化只與上述物理方面變化的總體效應(yīng)有關(guān)。將報(bào)告熒光的信號(hào)除以ROX熒光的信號(hào)，就能夠消除所有這些物理因素所引起的數(shù)據(jù)波動(dòng)。

18. 內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法哪種數(shù)據(jù)更精密？

是同樣可靠的。內(nèi)標(biāo)的優(yōu)點(diǎn)在于目標(biāo)基因與管家基因的反應(yīng)條件最接近一致，缺點(diǎn)在于目標(biāo)基因與管家基因的引物和探針相互之間會(huì)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)與抑制，導(dǎo)致它們的 PCR效率有差異。外標(biāo)的優(yōu)點(diǎn)在于目標(biāo)基因與管家基因的引物和探針之間沒有發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)與抑制的機(jī)會(huì)，但是不同管之間的反應(yīng)條件差異比同管的要大，也會(huì)導(dǎo)致它 們的PCR效率有差異。兩相比較，內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法的數(shù)據(jù)精確度是一樣的。

9. snp燕窩面膜的功效與作用

敏感肌可以用SNP燕窩睡眠面膜，SNP燕窩睡眠面膜比較溫和，質(zhì)地細(xì)膩，敷到臉上有嫩膚的效果，敏感肌也可以用。

10. SNP燕窩面膜適合油皮痘痘肌嗎

SNP睡眠面膜使用方法：護(hù)膚后將面膜均勻的涂抹于臉部(避開眼周)，再加以按摩促進(jìn)吸收，油皮或者怕會(huì)油的仙女，涂這個(gè)前可以不涂面霜，或者敷20分鐘后洗掉。

snp睡眠面膜主要分為三種功效：

藍(lán)色(海洋燕窩)：主打急救補(bǔ)水

黃色(黃金膠原蛋白)：主打緊致抗皺

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